常用的細(xì)胞破碎方法有哪些？

細(xì)胞破碎是指利用外力破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)容物包括目的產(chǎn)物成分釋放出來的技術(shù)，是分離純化細(xì)胞內(nèi)合成的非分泌型生化物質(zhì)（產(chǎn)品）的基礎(chǔ)。結(jié)合重組DNA技術(shù)和組織培養(yǎng)技術(shù)上的重大進(jìn)展，以前認(rèn)為很難獲得的蛋白質(zhì)現(xiàn)在可以大規(guī)模生產(chǎn)。

但是由于細(xì)菌、酵母、真菌、植物細(xì)胞壁的組成成分不同，且同類細(xì)胞結(jié)成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)也不同，所以其細(xì)胞壁的堅(jiān)固程度不同。而動物細(xì)胞雖沒有細(xì)胞壁，但具有細(xì)胞膜，也需要一定的細(xì)胞破碎方法來破膜，達(dá)到提取產(chǎn)物的目的。

在目前的細(xì)胞破碎方法中常用的有：

1. 高剪切均質(zhì)乳化破碎細(xì)胞

方法：高剪切均質(zhì)機(jī)主要是由于了轉(zhuǎn)子高速運(yùn)轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的高速線速度，還有頻率*的機(jī)械的效應(yīng)，伴隨著強(qiáng)勁的動能，讓組織或細(xì)胞可以在定子、轉(zhuǎn)子之間非常狹窄的空隙之中受到了非常的強(qiáng)烈的機(jī)械還有液力的剪切、液層的摩擦、離心的擠壓、撞擊的撕裂還有湍流等多種綜合性的效果，造成細(xì)胞破碎。

說明：均質(zhì)乳化機(jī)可用于 細(xì)胞破碎、酵母細(xì)胞破碎（畢赤酵母、釀酒酵母、漢遜酵母等）、大腸桿菌破碎、結(jié)核桿菌破壁、絲狀真菌破碎、人工倍體細(xì)胞破壁、動物細(xì)胞破碎、動物組織細(xì)胞破碎、Vero細(xì)胞破碎、花粉破碎、植物細(xì)胞、藻類破碎提取胞內(nèi)蛋白及核酸等動物組織的細(xì)胞破碎。

2. 組織搗碎機(jī)破碎細(xì)胞

方法：將材料配成稀糊狀液，放置于筒內(nèi)約 1/3體積，蓋緊筒蓋，將調(diào)速器先撥至最慢處，開動開關(guān)后， 逐步加速至所需速度。

說明：一般用于動物組織、植物肉質(zhì)種子、柔嫩的葉芽等，轉(zhuǎn)速可高達(dá) 10000rpm以上。適合單次細(xì)胞破碎量在 50-1000mL之間。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機(jī)械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。

3. 超聲波破碎細(xì)胞

方法：用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂，超聲對細(xì)胞的作用主要有熱效應(yīng)，空化效應(yīng)和機(jī)械效應(yīng)。

說明：處理少量樣本，操作簡單，重復(fù)性較好，節(jié)省時(shí)間；多用于微生物和組織細(xì)胞的破碎，如用大腸桿菌制備各種酶。因?yàn)槌暡óa(chǎn)生的化學(xué)自由基團(tuán)能使某些敏感性活性物質(zhì)變性失活；大容量裝置聲能傳遞，散熱均有困難，應(yīng)采取相應(yīng)降溫措施；對超聲波敏感和核酸應(yīng)慎用。

4. 組織勻漿器破碎細(xì)胞

方法：先將剪碎的組織置于管中，再套入研桿來回研磨，上下移動，即可將細(xì)胞研碎。勻漿器的研缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離。

說明：此法細(xì)胞破碎程度高，適用于量少和動物臟器組織。較易造成堵塞的團(tuán)狀或絲狀真菌，較小的革蘭氏陽性菌以及有些亞細(xì)胞器，質(zhì)地堅(jiān)硬，易損傷勻漿閥者，不適合用該法處理。